Оценка машин, оборудования и транспортных средств. Как интерпретировать значение t-критерия Стьюдента
Развитие Т-лимфоцитов происходит в центральном органе иммунитета - вилочковой железе (Ф. Бернет, 1971). Среди тимоцитов выделяют три самостоятельные популяции: Т-хелперы (помощники), Т-супрессоры (подавители) и Т-эффекторы. Четвертый тип тимоцитов - киллеров (убийц) накапливается под влиянием антигенной стимуляции Т-эффекторов и завершает тем самым иммунные реакции клеточного типа. Особое значение в настоящее время придается взаимоотношению Т-хелперов и Т-супрессоров, которые обладают способностью тормозить и останавливать антителопродукцию, обеспечивая иммунологическую толерантность (Л. Н. Фонталин, Л. А. Певницкий, 1978, и др.).
Для определения функциональной активности Т-системы применяются следующие методы: подсчет циркулирующих Т-лимфоцитов, реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), реакция ингибиции миграции лимфоцитов (РИМЛ), спонтанное розеткообразование клеток (Е РОК), чувствительность лимфоцитов к кортизолу, цитотоксические тесты при использовании антисывороток к Т-лимфоцитам, определение функциональной активности Т-супрессоров и др. (А. Н. Чередеев, 1976, и др.). Наиболее информативными методами являются РБТЛ и Е-РОК.
Метод РБТЛ основан на том, что Т-лимфоциты в питательной среде под влиянием стимулятора фотогемагглютинина (ФГА) могут превращаться (трансформироваться) в недифференцированные зародышевые клетки (бласты). Допускается, что это происходит за счет освобождения лизосомальных ферментов и разрушения РНК- Чем интереснее происходит превращение лимфоцитов в бласты, тем активнее и полноценнее Т-система (О. И. Епифанова с соавт., 1977).
Существует два метода определения РБТЛ : морфологический и изотопный. Наиболее перспективным методом является изотопный, основанный на определении блаеттрансформацин по включению меченого тимидина (Из) в ДНК лимфоцитов (И. Н. Брауде, 1969; П. Г. Назаров, В. И. Пуринь, 1975, и др). Результаты выражаются в индексах стимуляции.
По данным С. К. Евтушенко (1980), у доноров норма РБТЛ с ФГА составила 61,71 ±9,72 (размах индекса стимуляции после 72 ч инкубации составил от 18,36 до 231,24), что близко к данным литературы (А И. Евсеева с соавт., 1976). Для оценки спецификой сенсибилизации противомозговыми антителами Т-лимфоцитов вместо ФГА в инкубируемую смесь мы добавляли по 1 капле водно-солевого экстракта мозгового антигена (МАГ), приготовленного из различных участков мозга, предварительно определив его митогенпую активность (то есть находили минимальное количество антигена, которое вызывало бластн>ю трансформацию лимфоцитов). Параллельно проводится контроль без ФГА, МАГ и других антигенов.
Реакция спонтанного розеткообразования Т-клеток основана на образовании розеток из Т-лимфоцитов и эритроцитов барана (Е-РОК), которые являются индикаторами (маркерами) Т-лимфоцитов (М Jondal с соавт., 1972). В ограниченном препарате среди всех типов лейкоцитов подсчитывается процент розеткообразующих лимфоцитов. Норма Е-РОК, по нашим данным, составила (51,0+9,7)%, что также близко к данным литературы (С. И. Донское с соавт., 1975, и др.).
Низкий процент розеткообразования лимфоцитов говорит о пониженной активности Т-лимфоцитов, а если он резко снижен, то это указывает на иммунодефицитное состояние (R. Hong, 1977, и др.), требующее соответствующей иммуностимулирующей коррекции.
Проводятся попытки классифицировать поражения нервной системы при аллергии (С. И. Каплаи, 1967; Я. В. Медведев, 1968; W. Wilson, 1967, и др.). В частности, F. Speer (1967) предлагает многообразие всех клинических форм этой патологии объединить в общее понятие «нейроаллергия». Ряд авторов рассматривают нарушения нервной системы при аллергии как часть общего аллергического процесса (Н. К. Боголепов, С. И. Каплан, 1971; Б. С. Агте, С. К. Евтушенко, 1974; J. Blamantier, S. Denimal, 1966, и др.).
Наши последующие исследования (Б. С. Агте, С. К. Евтушенко, 1976, 1980) также подтверждают эти выводы, в связи с чем неврологические проявления аллергии в клинической практике мы условно называем нейроаллергопатией.
С помощью метода «спонтанных» розеток (розеткообразование с эритроцитами барана) определяют количество Т-лимфоцитов в крови. Обязательным является расчет абсолютного количества розеткообразующих лимфоцитов в 1 мкл крови. Вычисление только их процента среди всех лим-фоцитов может привести к ошибке. Например, в норме среди лимфоцитов крови содержится 60% Т-клеток, а при В-лейкозах Т-лимфоцитов в крови
может быть около 1%, но это не значит, что имеется 60-кратное угнетение Т-системы иммунитета. Если общее количество лимфоцитов у данного больного в 60 раз больше, чем у здорового человека, то абсолютное число Т-лимфоцитов в его крови нормально.
Реакция бласттрансформации
лимфоцитов под влиянием ФГА или в микст-культуре. Эту и предыдущую пробу необходимо проводить параллельно, поскольку при некоторых иммунодефицитах угнетение реакции бласттрансформации свидетельствует не о снижении уровня Т-лимфоцитов в крови, а об угнетении их функциональной активности. Например, при иммунодефиците с атаксией - телеангиэктазией регистрируется почти полное угнетение бласттрансформации при нормальном количестве Т-розеток среди лимфоцитов. До разработки метода «спонтанных» розеток угнетение бласттрансформации расценивали как показатель снижения
количества Т-лимфоцитов в крови.
Определение динамики бласттрансформации. Эту реакцию необходимо учитывать не в один какой-либо срок культивирования лимфоцитов, а в динамике с использованием разных доз митогена. Кривые зависимости время - эффект и доза - эффект лучше всего отражают данный вид функции-ональной активности лимфоцитов. Наиболее объективный учет бласттранс-формации во всех случаях требует применения радиоизотопной методики с определением включения меченых нуклеотидов в клетки. Оценка продукции лимфоцитами периферической крови гуморальных медиаторов клеточного иммунитета. Наиболее распространен тест подавления миграции макрофагов фактором, угнетающим их миграцию, выделяемым сенсибилизированными лимфоцитами под влиянием соответствующего антигена. С помощью этого метода можно установить сенсибилизацию организма к тому или иному антигену.
Постановка кожных реакций гиперчувствительности замедленного типа на широко распространенные антигены (туберкулин, трихофитии и др.). Конечно, негативные реакции не могут служить доказательством неполноценности Т-системы иммунитета, так как организм может быть не сенсиби-лизирован к используемым препаратам. Контактная аллергия к динитро-хлорбензолу (ДНХБ). Этот гаптен при накожной аппликации вызывает развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа. Повторное нанесение препарата дает типичную кожную реакцию. Поскольку вероят-ность контакта индивидуума с данным редким химическим соединением ничтожна, проба с ДНХБ служит весьма распространенным методом оценки способности организма развивать гиперчувствительность замедленного типа, т. е. функциональной активности Т- системы иммунитета.
Отторжение аллогенного кожного лоскута. Эта реакция также относится к гиперчувствительности замедленного типа и осуществляется в основном Т-лимфоцитами. Однако трансплантация чужеродной ткани приводит к сенсибилизированности организма по отношению к трансплантационным анти-генам, что может оказаться нежелательным при последующем лечении больного такими методами, как пересадка костного мозга, вилочковой железы и др.
Биопсия лимфатических узлов и гистологическая оценка тимусзависимых областей и вилочковой железы. Эти тесты ставятся в сложных для диагностики случаях при подозрениях на комбинированные иммунодефициты и злокачественные новообразования.
В 1981 г. Всемирная организация здравоохранения опубликовала Меморан-дум по правильному и неправильному применению широко используемых методов клинической иммунологии. Этот документ, составленный группой авторитетных клинических иммунологов, характеризует особенности показаний к применению наиболее часто используемых тестов. В документе выделяется два уровня значимости исследования - абсолютная необхо-димость и полезность. Анализируется 8 иммунологических тестов.
1. Количественная оценка иммуноглобулинов в сыворотке крови абсолютно необходима при подозрении на наличие первичного или вторичного иммуно-дефицита, а также для слежения за течением заболеваний при гамма-глобу-линотерапии. Количественная оценка сывороточных иммуноглобулинов полезна для отличия «доброкачественных» идиопатических моноклональных гаммапатий от миеломы. Определение уровня IgМ в пуповинной крови новорожденных полезно при подозрении на врожденную инфекцию.
2. Иммуноэлектрофоретический анализ иммуноглобулинов в биологических жидкостях абсолютно необходим при подозрении на наличие следующих болезней: миелома, макроглобулинемия Вальденстрема, болезни тяжелых цепей, амилоидоз, болезни, связанные с отложением иммуноглобулинов в тканях. Этот анализ также необходим при таких аномалиях, как наличие криоглобулинов, протеинурии типа Бенс- Джонса, повышенной вязкости сыворотки. Иммуноэлектрофорез полезен при некоторых им-мунопролиферативных заболеваниях.
3. Оценка уровня общего IgЕ абсолютно необходима только в одном редком случае (гипер-IgЕ-синдром, ассоциированный с эозинофилией и рецидиви-рующими инфекциями), но может быть полезна при дифференциации между IgЕ- и не IgЕ-опосредуемыми нарушениями, которые клинически неразличи-мы (риниты, бронхиальная астма, дерматиты и сыпи, пищевая неперено-симость). Измерение количества специфического IgЕ не является абсолютно необходимым ни при какой патологии. Этот тест не может полностью заменить аллергологический анамнез и кожные пробы. Оценка уровня специфического IgЕ полезна при тяжелых дерматитах или дермографизме, в случаях, когда терапия приводит к изменению кожных реакций, при очень сильных кожных реакциях и т. п.
4. Определение комплемента по тотальному тесту 50 % гемолитической активности является необходимым только при подозрении на генетически обусловленные дефекты в системе комплемента. Оценка по этому тесту или путем определения С3 и С4 компонентов комплемента полезна для слежения за течением болезни и эффективностью терапии при гломерулонефрите, при таких иммунокомплексных болезнях, как системная эритематозная волчанка, и некоторых формах васкулитов, а также при геморрагической лихорадке Денге.
5. Определение иммунных комплексов в биологических жидкостях не является абсолютно необходимым ни в каких клинических ситуациях. Их присутствие в сыворотке крови неспецифично для болезней иммунных комплексов. Повреждения тканей, индуцированные иммунными компексами, могут развиваться без определимых количеств циркулирующих в крови комплексов. Наоборот, присутствие комплексов в крови может не сопрово-ждаться наличием тканевых повреждений. Более ценным является прямой анализ проб тканей. Оценка иммунных комплексов может быть полезной для определения активности процесса при таких болезнях, как ревматоидный артрит и системная красная волчанка, и при контроле за эффективностью обменных переливаний плазмы и для прогноза течения таких опухолевых процессов, как острый лейкоз.
6. Определение аутоантител путем непрямой иммунофлюоресценции абсолютно необходимо как тест на наличие антиядерных антител при диагностике системной красной волчанки. Обнаружение антиядерных антител полезно для диагностики так называемых смешанных болезней соединительной ткани, хронического активного гепатита и прогрессивного системного склероза. Тест на тиреоидные аутоантитела необходим для диагностики хронического тиреоидита и микседемы взрослых. Определение других аутоантител методом непрямой иммунофлюоресценции полезно в конкретных нечастых случаях.
7. Определение количества В- и Т-клеток абсолютно необходимо для диагностики и слежения за течением первичных иммунодефицитов, а также для классификации лимфопролиферативных заболеваний. При этом желательно использовать одновременно несколько реагентов, например моноспецифические антииммуноглобулиновые антитела и моноклональные антитела против лимфоидных популяций. Изучение субпопуляций Т- и В-лимфоцитов полезно у отдельных пациентов.
8. Оценка ответа лимфоцитов на митогены как показатель клеточно - опосре-дованного иммунитета не может быть рекомендована как каждодневный (рутинный) метод. Его следует использовать только выборочно. Показатель единичного измерения, даже если он далеко выходит за пределы нормы, имеет очень малую клиническую ценность и не обязательно свидетельствует о нарушении клеточно-опосредованного иммунитета. Оценка этой формы иммунитета абсолютно необходима в случаях предполагаемого или дока-занного первичного иммунодефицита. Оценка клеточного иммунитета поле-зна для исследования вторичных иммунодефицитов, включая те, которые связаны с хроническими инфекциями, и для контроля за применением иммуностимулирующей терапии.
УДК 658.012.4:001
ОЦЕНКА НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА ПРЕДПРИЯТИЯ ПО МЕТОДУ ЭКСПЕРТНЫХ ОЦЕНОК
Т.П. Гончаренко, преподаватель
Украинская академия банковского дела
Введение
В последнее время особую актуальность приобрели вопросы, связанные с определением и оценкой экономического потенциала предприятия с точки зрения необходимости позиционирования предприятия в будущем, определения его стратегических возможностей. Одним из узловых компонентов экономического потенциала предприятия является научно-технический потенциал, оценке которого посвящается данная статья
Постановка задачи
В статье предполагается обосновать необходимость применения метода экспертных оценок для определения уровня научно-технического потенциала промышленного предприятия.
Результаты
Одним из основных признаков современного этапа развития промышленного производства является существенный рост результативности заводской науки, возможностей и масштабов практического использования научных достижений. В то же время само производство постоянно усложняется, и для совершенствования его технической базы требуется проведение широкого круга предварительных научных исследований и экспериментов, что, в свою очередь, обеспечивается наращиванием научно-технического потенциала
Процессы глобализации изменяют ориентиры в деятельности промышленных предприятий - на первый план выдвигается конкурентоспособность самого предприятия и его продукции с позиций возможности предоставления на рынок продукта, способного не только удовлетворить определенную потребность, но и сформировать потенциальную. В свою очередь, конкурентоспособность в значительной мере обеспечивается наукоемкостью продукции, способностью предприятия быстро реагировать на изменения вкусов и предпочтений потребителей за счет формирования определенного задела научных знаний (в виде научных разработок).
Комплексной характеристикой, которая позволяет определить возможности предприятия в научно-технической сфере, является научно-технический потенциал, позволяющий позиционировать предприятие с точки зрения конкурентоспособности и инвестиционной привлекательности. В общем случае научно-технический потенциал промышленного предприятия означает возможность организации (предприятия) осуществлять и ускорять научно-технический прогресс в рамках заданных технологий и использовать достижения научно-технического прогресса для предоставления на рынок инновационной продукции.
Рисунок 1 – Научно-технический потенциал в структуре экономического потенциала промышленного предприятия
На промышленном предприятии научно-технический потенциал состоит из: кадров ученых, инженеров, конструкторов и других специалистов соответствующей квалификации; средств научного производства (здания, оборудование, приборы); материалов, сырья, энергии и информационных фондов, предназначенных для проведения научных исследований, разработок и изготовления, опытных образцов новой продукции, а также для организации ее производства и использования в народном хозяйстве. Научно-технический потенциал объективно охватывает как ресурсы накопленных знаний (сами достижения науки), так и сферу их применения (производство) во взаимосвязи. Однако следует заметить, что научно-технический потенциал включает не только ресурсы науки в виде соответствующих научных исследований и разработок, но и способность проектных и конструкторских подразделений, а также производственного аппарата практически реализовывать результаты исследований, т.е. научно-технический потенциал представляет собой современную форму интеграции потенциала науки и потенциала сферы применения знаний.
В этом аспекте особую актуальность приобретают вопросы анализа, диагностики и оценки научно-технического потенциала промышленного предприятия с позиций его инвестиционной привлекательности и конкурентоспособности.
На сегодняшний день однозначной, четко сформированной и апробированной методики оценки научно-технического потенциала предприятия нет. Более того, в большинстве методик по оценке инвестиционной привлекательности предприятия не используются показатели научно-технического потенциала, что значительно искажает оценку.
Анализируя передовой опыт в этом вопросе, мы пришли к выводу, что сегодня одним из наиболее подходящих методов оценки, отвечающим большинству требований, выдвигаемых к подобным оценочным работам, является метод экспертных оценок. Этот метод наиболее прост с точки зрения возможности его применения и возможности получения релевантной информации, не ограничивается количеством экспертов, т.е. чем больше экспертов будет привлечено, тем более точная оценка будет получена.
Экспертный метод базируется на оценивании научно-технического потенциала предприятия по определенным заранее критериям с учетом присваиваемого каждому критерию веса. Критерии можно задавать самостоятельно. Мы сформировали ряд критериев на основе диагностических интервью руководителей предприятий, а также специалистов по исследованию научно-технического потенциала предприятия. Вес каждому критерию был присвоен исходя из объективной значимости самого критерия. Ниже предлагается перечень сформированных нами критериев:
Система управления научно-техническим потенциалом.
Наличие научно-исследовательских подразделений любой формы организации.
Традиции научно-технические и исследовательские.
Квалификация персонала (управленческого, научно-технического).
Результативность научно-технических работ.
Количество патентных разработок и динамика их развития.
Наличие открытых явлений или технологий (запатентованных).
Уровень научных разработок и по отношению к конкурентам.
Уровень научных разработок по отношению к мировым достижениям.
Обеспеченность ресурсами для проведения научно-технических и исследовательских работ.
Информационная поддержка.
Научно-технический и исследовательский задел.
Процедура реализации научных знаний в реальное
производство.
Стратегия НИОКР.
Реакция потребителей на наукоемкость продукции.
Процедура контроля.
Стоимость научных исследований.
Количество научно-исследовательских проектов, которые не привели к получению коммерческого результата.
Маркетинг НИОКР.
Для оценки научно-технического потенциала можно использовать как все предложенные нами критерии, так и выборочно отдельные, но чем большее количество критериев будет использовано при оценке научно-технического потенциала, тем точнее результат будет получен. Так же важным условием является количество привлеченных экспертов, точность полученной оценки зависит от количества проведенных экспертиз.
Полученная оценка может быть использована при анализе инвестиционной привлекательности предприятия, анализе конкурентоспособности предприятия, формировании корпоративной стратегии и стратегий других уровней управления. Научно-технический потенциал играет важную роль в деятельности предприятия, поэтому его оценка может быть использована в различных видах анализа деятельности предприятия, а также при оценке экономического потенциала.
Таблица 1 – Пример формы экспертных оценок
| Критерий | Вес критерия | Экспертная оценка |
||||||||||
| 1 | 2 | 3 |
||||||||||
| Система управления научно-техническим потенциалом | 0,1 | 3 | 5 | 6 | 2 | 7 | 1 | 9 | 2 | 2 | 2 |
|
| Наличие научно-исследовательского подразделений любой формы организации | 0,1 | 1 | 3 | 2 | 4 | 1 | 5 | 5 | 7 | 8 | 1 |
|
| Традиции научно-исследовательские, научно-технические | 0,1 | 7 | 7 | 2 | 5 | 6 | 9 | 5 | 4 | 2 | 7 |
|
| Квалификация персонала | 0,1 | 4 | 5 | 4 | 6 | 3 | 7 | 8 | 9 | 9 | 4 |
|
| Результативность научно-исследовательских и научно-технических работ | 0,05 | 5 | 2 | 3 | 4 | 6 | 7 | 2 | 3 | 4 | 8 |
|
| Количество патентных разработок и динамика развития | 0,05 | 4 | 7 | 5 | 6 | 3 | 3 | 3 | 4 | 8 | 6 |
|
| Наличие открытых явлений или технологий | 0,05 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
|
| Уровень научных разработок и по отношению к конкурентам | 0,02 | 2 | 6 | 5 | 4 | 7 | 8 | 9 | 6 | 5 | 4 |
|
| Продолжение таблицы 1 |
||||||||||||
| 1 | 2 | 3 |
||||||||||
| Уровень научных разработок по отношению к мировым достижениям | 0,02 | 7 | 4 | 3 | 6 | 7 | 8 | 9 | 3 | 4 | 5 |
|
| Наличие выданных лицензий на право использования технологии, материала и.т.п. | 0,02 | 2 | 3 | 2 | 3 | 4 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 |
|
| Обеспеченность ресурсами для проведения научно-исследовательских работ | 0,03 | 3 | 5 | 6 | 2 | 7 | 1 | 9 | 2 | 2 | 2 |
|
| Информационная поддержка | 0,02 | 6 | 5 | 4 | 3 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
|
| Научно-исследовательский и научно-технический задел | 0,03 | 2 | 3 | 4 | 3 | 2 | 3 | 4 | 5 | 4 | 3 |
|
| Стратегия НИОКР | 0,01 | 5 | 5 | 5 | 6 | 7 | 7 | 8 | 7 | 6 | 5 |
|
| Процедура реализации научных знаний в реальное производство | 0,02 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 8 | 8 | 7 | 6 |
|
| Реакция потребителей на наукоемкость продукции | 0,02 | 4 | 7 | 5 | 6 | 3 | 3 | 3 | 4 | 8 | 6 |
|
| Процедура контроля | 0,01 | 5 | 2 | 3 | 4 | 6 | 7 | 2 | 3 | 4 | 8 |
|
| Стоимость научных исследований | 0,11 | 7 | 7 | 2 | 5 | 6 | 9 | 5 | 4 | 2 | 7 |
|
| Количество научно-исследовательских проектов, не приведших к получению коммерческого результата | 0,11 | 1 | 3 | 2 | 4 | 1 | 5 | 5 | 7 | 8 | 1 |
|
| Маркетинг НИОКР | 0,03 | 2 | 2 | 2 | 3 | 4 | 4 | 3 | 2 | 3 | 4 |
|
В дальнейшем, если необходимо провести сопоставительную оценку научно-технического потенциала различных предприятий, которая может быть использована при анализе инвестиционной привлекательности, на основе полученных оценок можно сформировать матрицу, которая будет отображать позиции предприятия в плоскости «научно-технический потенциал – прибыльность».
Выводы
В данной статье предложена процедура оценивания научно-технического потенциала предприятия по методу экспертных оценок, сформированы критерии, которые используются в данной методике, обоснованы необходимость применения данного метода и важность получения такой оценки.
In this article is offered the procedure of enterprise scientific and technical potential assessment by method of expert evaluation, are formed criteria which are used in the given method, is based the necessity of use of the given method and importance of getting such estimate.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Загорський В.С. Вовчак О.Д. Інноваційна стратегія підприємства та напрями її реалізації на сучасному етапі. //Регіональні перспективи. - 2000р. - №2-3.
Захарин С.В. Активізація інноваційної діяльності промислових підприємств //Фінанси України. – 2003.- №1.
Велисов А.В. Стратегическое управление корпоративными инновациями. – СПб.:ИСЭПРАН, 1999.-167с.
Сопильняк И.С. Инновационная политика предприятия в условиях рынка //Экономика: проблемы теории и практики: Сб. научных трудов.- Вып. 143 – Днепропетровск: ДНУ, 2002. –92с.
Справочное пособие по анализу деятельности научных организаций /А.А. Казанцев, Б.И. Майданчик, Б.Д. Моторыгин и др. – М.: Финансы и статистика, 1989. – 304 с.
Количественная оценка
Определение количества Т-лимфоцитов ( CD 3+) методом иммунных розеток в готовых препаратах
Принцип метода: На 1 этапе методом центрифугирования в градиенте плотности из крови выделяют лимфоциты. На 2 этапе с помощью реакции розеткообразования с эритроцитами барана определяют процент Т-лимфоцитов от общего числа лимфоцитов. Реакция розеткообразования основана на наличии на поверхности Т-лимфоцитов рецепторов, способных фиксировать эритроциты барана. При добавлении к суспензии лимфоцитов эритроцитов барана, последние адсорбируются Т-лимфоцитами, а образующиеся при этом структуры называются розетками. Общее количество лимфоцитов подсчитывают под микроскопом по количеству розеток.
Качественная (функциональная) оценка
1. Оценка способности к пролиферации в реакции бластной трансформации лимфоцитов
Принцип метода: Т-лимфоциты под воздействием некоторых биостимуляторов, например, фитогемагглютинина (ФГА) в культуре in vitro способны превращаться в большие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.
2. Определение количества т-супрессоров, т-хелперов и т-киллеров в реакции иммунофлюоресценции (риф)
Принцип метода: Лимфоцитарная взвесь обрабатывается моноклональными антителами против CD-маркеров отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, а затем меченой флюорохромом антиглобулиновой сывороткой. Подсчет флюоресцирующих клеток проводят под люминесцентным микроскопом (двухэтапная РИФ).
Иммунологический статус Тесты первого уровня
|
Тест |
Показатель | ||
|
Число лейкоцитов; лейкоформула |
Общее число лейкоцитов |
4,5-9,5 тыс/мкл |
|
|
Нейтрофилы | |||
|
Лимфоциты |
18-38% (1250-2500 в 1 мкл) |
||
|
Моноциты | |||
|
Базофилы | |||
|
Эозинофилы | |||
|
Т- и В-лимфоциты |
Т-лимфоциты | ||
|
Т-лимфоциты абс. |
1000-2000 в 1 мкл |
||
|
В-лимфоциты | |||
|
В-лимфоциты абс. |
100-300 в 1 мкл |
||
|
Уровень Ig в сыворотке крови | |||
|
10,0-20,0 г/л |
|||
|
Фагоцитарная активность лейкоцитов крови (показатели фагоцитоза) |
Фагоцитарный индекс |
Для кандиды 1-2,5 Для стафилококка 4-9 |
|
|
Фагоцитарное число |
Для кандиды 40-90 Для стафилококка 40-80 |
Источник информации: О.К. Поздеев «Медицинская микробиология» под редакцией акад. РАМН В.И. Покровского (Москва, 2001)
Тесты второго уровня (аналитические)
Определение субпопуляций Т-лимфоцитов (Т-хелперы, Т-супрессоры, Т-киллеры).
Оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов (реакция бласттрансформации).
Определение спонтанной миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов.
Определение лимфоцитов, несущих поверхностные иммуноглобулины различных классов (В-лимфоцитов).
Определение медиаторов иммунной системы.
Кожные тесты гиперчувствительности замедленного типа.
ЗАНЯТИЕ № 16
ТЕМА: ИТОГОВОЕ ЗАНЯТИЕ ПО РАЗДЕЛАМ «ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРИКЛАДНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ»
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
Микрофлора тела человека. Нормальная (резидентная) микрофлора человека. Формирование и развитие нормальной микрофлоры. Функции нормальной микрофлоры.
Дисмикробиоценоз (дисбактериоз), причины, виды, принципы коррекции.
Понятие об инфекции. Определение, общая характеристика. Отличия инфекционных болезней от неинфекционных.
Роль микроорганизма в инфекционном процессе. Инфицирующая доза. Способы заражения. Входные ворота. Патогенность и вирулентность. Генетический контроль патогенности и вирулентности. Факторы, повышающие и снижающие вирулентность микробов.
Факторы патогенности. Методы определения вирулентности, единицы. Облигатно-патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.
Токсичность и токсигенность микроорганизмов. Эндотоксины, свойства, получение, применение. Экзотоксины, свойства, получение, единицы измерения. Типы экзотоксинов, механизм действия.
Роль макроорганизма в развитии и течении инфекционных болезней. Наследственные факторы. Анатомо-физиологическое состояние организма. Роль условий жизни в развитии и течении инфекционных болезней.
Динамика инфекционного процесса, его особенности.
Биологический метод исследования, этапы, оценка. Лабораторные животные. Способы заражения.
Факторы и механизмы неспецифической резистентности. барьерные и противомикробные свойства кожи, слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.
Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим, b-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.
Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм действия интерферонов.
Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции активированных компанентов комплемента. Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс. Методы определения активности системы комплемента.
Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции). Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы фагоцитоза.
Показатели фагоцитоза и методы их определения.
Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.
Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые, видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены бактерий. Антигенные свойства грибов.
В-лимфоциты: развитие, маркеры. В-клеточный рецептор: структура (константные и вариабельные участки, полипептидные цепи). Механизмы В-клеточной активации. Функция В-лимфоцитов.
Антитела. Структура молекулы иммуноглобулинов: вариабельные и константные области, расположение и структура доменов. Антигенсвязывающие участки.
Антителогенез, динамика синтеза антител. Поликлональные и моноклональные антитела
Классы и субклассы иммуноглобулинов, изотипы, аллотипы, идиотипы. Биологические свойства иммуноглобулинов
Механизм взаимодействия антител с антигенами. Валентность, аффинность и авидность антител. Перекрестные реакции. Полные и неполные антитела. Иммунные комплексы.
Биологические эффекты взаимодействия антител с антигенами: активация комплемента, нейтрализация токсинов и вирусов, лизис, агглютинация и опсонизация микроорганизмов, торможение адгезии, инвазии, подавления фагоцитарной реакции.
Прямая и непрямая реакция Кумбса. Простая радиальная иммунодиффузия в агаре по Манчини.
Т-лимфоциты: развитие, маркеры. Субпопуляции Т-лимфоцитов (Т-хелперы нулевые, Т-хелперы 1, 2 типов, Т-регуляторы; Т-эффекторы: цитотоксические Т-лимфоциты, Т-лимфоциты памяти).
Т-клеточный рецептор: строение, типы, генетический контроль, разнообразие. Роль Т-клеточного рецептора. Т-зависимые антигены.
Клеточный иммунный ответ, динамика развития, мишени действия Т-килеров, проявления.
Серологический метод исследования: задачи, этапы, оценка. Общая классификация иммунологических методов диагностики: серотипирование, серодиагностика
Диагностикумы. Диагностические иммунные сыворотки. Методы их получения. Поливалентные, монорецепторные адсорбированные (поликлональные) и моноклональные диагностические сыворотки и тест-системы.
Качественная и количественная оценка серологических реакций: титр иммунных сывороток, диагностический титр, нарастание титра антител, аффинность и авидность антител.
Механизмы течения и проявления реакций агглютинации. Нагрузочные реакции агглютинации: постановка и учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), латекс-агглютинации. Реакция ко-агглютинации. Оценка результатов.
Реакции иммунопреципитации: варианты постановки. (кольцепреципитация по Асколи, двойная диффузия в агаре, иммуноэлектрофорез), методы учета и оценки.
Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.
Реакции иммунного лизиса и связывания комплемента: методика постановки, учета и оценки, применение в диагностике инфекционных заболеваний.
Реакции иммунофлюоресценции. Диагностическое значение, информативность, варианты постановки реакций: прямой и непрямой.
Иммуноферментный анализ. Варианты постановки. Возможные ошибки и ограничения метода, иммуноферментного анализа.
Иммуноблотинг (вестерн-блотинг). Проведение и учет результатов. Варианты применения метода.
Радиоиммунный анализ, сущность, способы постановки, методы учета и оценки реакций, достоинства и недостатки метода.
Аллергия, определение, стадии аллергии. Аллергены. Бытовые, пыльцевые, эпидермальные, пищевые, химические, лекарственные, микробные экзоаллергены. Пути проникновения аллергенов в организм. Эндоаллергены.
Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ). Медиаторный тип ГНТ (I). Анафилактический шок, механизм развития. Атопии, механизм развития, клинические формы. Цитотоксический тип ГНТ (II). Иммунокомплексный тип ГНТ (III).
Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ, IV). Контактная аллергия. Инфекционная аллергия.
Методы диагностики аллергических болезней. Кожные пробы. Провокационные тесты. Элиминационные тесты. Методы аллергодиагностики in vitro – определение антигенспецифических и антигеннеспецифических IgЕ.
Общие принципы специфической и неспецифической профилактики и терапии аллергических заболеваний. Проведение специфической аллерговакцинации. Профилактика аллергических заболеваний на производстве, в быту, при оказании медицинской помощи
Пассивная иммунопрофилактика. Определение. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Типы и способы получения. Показатели активности. Показания к применению.
Иммунотерапия. Определение. Препараты для иммунотерапии. Механизм действия. Показания к применению. Осложнения иммунопрофилактики и иммунотерапии.
Иммунный статус организма. Популяционные и возрастные особенности иммунного статуса. Показатели и методы определения и оценки.
Иммунограмма. Показания к назначению иммунограммы. Основные правила интерпретации иммунограмм. Принципы постановки иммунологического диагноза.
Иммунодефициты: наследственные и приобретенные. Клинические синдромы.
Аутоиммунные болезни. Механизмы развития. Клинические формы. Аутоантигены.
Противоопухолевый иммунитет. Концепция иммунного надзора. Характеристика антигенов опухолей. Механизм элиминации опухолевых клеток под действием цитотоксических лимфоцитов и естественных киллеров. Гуморальный тип иммунного ответа на опухолевые антигены, роль в противоопухолевом иммунитете. Механизмы ускользания опухолей от иммунного надзора.
Трансплантационный иммунитет. Типы трансплантатов. Трансплантационные антигены. Условия развития реакции иммунного отторжения трансплантата и его механизмы. Способы подавления трансплантационной реакции Осложнения.
Аналитическое заключение по результатам оценки иммунного статуса. Соответствие с другими лабораторными тестами.
Особенности изменений иммунного статуса при различных иммунопатологических состояниях: первичных и вторичных иммунодефицитах, органоспецифических и органонеспецифических аутоиммунных заболеваниях, аллергических заболеваниях, опухолях.
Z-показатель или стандартизированный показатель - этопоказатель, определяющий количество стандартных отклонений, на которое отклоняется полученный результат от среднего результата в нормативной выборке.
Шкала Z-оценок (стандартизированныйZ-показатель)
Шкала стандартных отклонений
Шкала стандартных отклонений в самом простом варианте представляет собой шкалу из трех уровней, каждый из которых соответствует определенной степени выраженности диагностируемого свойства. Дадим характеристику этих уровней.
· Первый уровень соответствует левой части распределения до одной сигмы и отражает низкуюстепеньвыраженности свойства. Все сырые оценки, которые попадают в данный диапазон, независимо от первичного значения, будут свидетельствовать о низкой выраженности диагностируемого параметра.
· Второй уровень шкалы соответствует диапазону от 1 сигмы слева до одной сигмы справа. В центре этого диапазона находится среднее значение по выборке. Данный уровень отражает среднюю степень выраженности свойства. Согласно функции нормального распределения этот уровень имеют 68, 27% испытуемых в нормативной выборке.
· Третий уровень, отражающий значительную выраженность исследуемого свойства, занимает диапазон от первой сигмы справа до правого конца кривой нормального распределения.
В простом варианте описанная шкала состоит из трех уровней, однако возможны варианты и с большим количеством градаций. Как правило, в этих вариантах первый и третий уровни разбиваются на дополнительные уровни в соответствии с интервалами стандартных отклонений.
Недостатки данной шкалы очевидны. Во-первых, шкала имеет небольшое количество градаций, что обусловливает потери диагностической информации. Во-вторых, данная шкала представляет собой, по сути, рейтинговую нормализованную шкалу. Это ограничивает возможности статистического анализа полученных результатов.
На основе значений Z-показателя составляется шкала Z-оценок. Дадим ее характеристику.
· Математически Z-показатель рассчитывается как отношение разности данной сырой оценки и средней оценки в нормативной группе к величине стандартного отклонения.
· Шкала Z-оценок включает 7 или 9 меток. По своей структуре она эквивалентна шкале стандартных отклонений.
· Название «Z-показатель» соответствует представлению данных в форме нормального распределения (Z-распределения).
· Метка в середине шкалы соответствует сырому среднему значению в популяции и принимает значение «0».
· Слева и справа от средней метки находятся равные интервалы, которые соответствуют интервалам 1, 2, 3 и 4 сигм (средних квадратичных отклонений).
· Метки справа имеют соответственно значения «1», «2», «3» и «4 (в случае, если добавляется интервал от 3 сигмы до 4 сигмы).
· Метки справа от среднего значения имеют соответствующие отрицательные значения от «-1» до «-3» или «-4».
Таким образом, шкала Z-оценок включает отрицательные и положительные значения, а также оценку «0». Такая структура шкалы создает трудности для последующего анализа и интерпретации полученных данных. В связи с этим на основе Z-показателя предложены более приемлемые варианты нормализации сырых значений. Одним из таких вариантов является преобразованныйZt-показатель.
Zt-показательпредставляет собой преобразованную Z-оценку.Zt-оценкавычисляется по формуле Zt = A+BxZ, где
А – среднее значение распределения преобразованных оценок,
В – стандартное отклонение преобразованного распределения,
символ «х» - знак умножения.
Из приведенной формулы следует, что Zt учитывает не только среднее значение и среднее квадратичное отклонение распределения сырых оценок, но также среднее значение и среднее квадратичное отклонение распределения уже нормализованных оценок. Преимущество такого преобразования Z-показателя состоит в том, что статистические параметры нормализованного распределения могут выбираться произвольно. В психометрии по общему согласию специалистов в качестве среднего значения нормализованного распределения было выбрано значение «50», а значение стандартного отклонения - «10». В этом случае Zt-показатель стал называться как «Т-балл».
Шкала Т-баллов – это шкала стандартизированных оценок, в которой каждая оценка рассчитывается по формуле:
T = 50+10х(сырая оценка – средняя сырая оценка)/стандартное отклонение распределения сырых оценок.
Т-баллы всегда принимают положительные значения и имеют нормальное распределение со средним значением «50» и стандартным отклонением «10». «Нормальные» оценки по шкале Т-баллов, свидетельствующие о средней выраженности диагностируемого свойства, соответствуют диапазону в пределах 2 стандартных отклонений, обычно от 30 до 70 Т-баллов.
Как и в случае шкалы Z-оценок, основные метки Т-шкалы в целом соответствуют меткам шкалы стандартных отклонений. Например, интервал Т-баллов соответствует интервалу [среднее значение…. одна сигма] по шкале стандартных отклонений слева, или интервалу по шкале Z-оценок.
Шкала Т-баллов удобнее для интерпретации по сравнению с предыдущими шкалами. По своей форме она представляет собой шкалу интервалов и имеет непрерывный характер. С другой стороны, следует помнить, что шкала Т-баллов по сути подобна шкале стандартных отклонений и в строгом смысле она не является шкалой интервалов. В ее конструкции приняты определенные условные допущения, функция которых заключается в обеспечении удобства восприятия и трактовки диагностических данных. Поэтому при интерпретации Т-баллов не стоит переоценивать численные значения нормализованных показателей. Например, если у одного испытуемого по диагностической шкале Т=55, а другого по этой же шкале Т=60, то это совсем не означает, что у первого диагностируемое свойство имеет меньшую выраженность, чем у второго. Оценка значений Т-баллов проводится по диапазонам, эквивалентным шкале стандартных отклонений. Еще раз отметим, что преимущество Т-баллов состоит в возможности более удобного и наглядного представления результатов, например, в виде графика.
Преобразование в шкалу Т-баллов нашло применение в ряде широко используемыхвклиникеопросников, например, Миннесотском мнгогофазном личностном опроснике (MMPI).
Основным недостатком преобразования Z-оценки в Zt-показатель является привязка оценки полученных диагностических результатов к нормативным данным, точнее говоря, к среднему значению и среднему квадратичному отклонению нормативной выборки. Поскольку получить полностью репрезентативную нормативную выборку крайне трудно, нормативные данные чаще всего отражают распределение диагностируемого свойства не в популяции в целом, а лишь в выборке испытуемых, взятой для проведения нормализации. Следует учитывать, что выборканормализации может значительно отличаться от популяции, представителем которой является данный конкретный испытуемый. В результате некорректного перевода первичных оценок в стандартизированныеможетзначительно снизиться валидность и достоверность полученных диагностических данных.
С целью устранения указанного выше недостатка предложены способы перевода в стандартизированные показатели, не зависящие от выборки стандартизации. Такой способ нормализации первичных оценок используется в технологии анализа тестовых заданий . В этой технологии нормализация сырых оценок осуществляется не на основе описательной статистики, а с помощью метода максимального правдоподобия с логарифмическимшкалированием.
Способ перевода в Т-баллы на основе теории анализа тестовых заданий показал достаточно высокую эффективность в ряде психодиагностических методик в клинике.